Биохимические и иммунологические аспекты применения пробиотика "canigest” на основе Enterococcus faecium молодым собакам разных пород

Пудовкин Д.Н.,

ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины»

Неотъемлемой частью организма млекопитающих являются микроорганизмы, которые заселяют ротовую полость, желудочно-кишечный тракт, кожу и влагалище, другие органы. Такой симбиоз необходим для нормального гомеостаза макроорганизма, его развития и жизнедеятельности. Эволюционно сложившиеся симбиозы у жвачных, моногастричных травоядных, всеядных и плотоядных животных существенно отличаются по видовому составу микроорганизмов, например, в кишечнике и являются по-своему уникальной составляющей у каждого вида животных.

Изучение микрофлоры фекалий здоровых животных, а также изменения в соотношении отдельных групп или видов бактерий в кишечнике остаётся актуальным до настоящего времени. При этом нарушения в микробном пейзаже фекалий и соответственно в желудочно-кишечном тракте являются дисбактериозом или дисбиозом.

Коррекция дисбиотических нарушений кишечника способствует развитию восстановительных механизмов в организме в целом, повышает иммунитет и резистентность.

Целью исследования было изучение влияния пробиотика CANIGEST, в состав которого входят микроорганизмы Enterococcus faecium SF68, на местный иммунитет кишечника и на резистентность щенков в период роста и развития после отъёма.

Исследования проводили на 24 собаках месячного возраста пород лабрадор, манчестерский терьер, гончая, бигль, фокстерьер, сразу после отъёма от их матерей. Щенков брали из одного помета, распределяли поровну в подопытную и контрольную группы, подбирали одинаковое количество кобелей и сук. Животные находились в одинаковых условиях содержания и кормления. Щенки были размещены по парам в вольерах. Длительность наблюдений составила 44 дня.

После отъема в возрасте 8 недель, в каждую группу отделили по 7 щенков. В подопытной группе щенкам дополнительно назначали пробиотик на основе Enterococcus faecium (NCIMB10415; SF68) в количестве 5х10⁸ КОЕ/г. Еженедельно измеряли массу тела, брали пробы корма. Пробы крови отбирали на 10,18,31 и 44 недели эксперимента. Все собаки были вакцинированы живой ослабленной вакциной против чумы собак подкожно в возрасте 9 недель с ревакцинацией в 12 недель.

Было установлено, что добавление живой пробиотической культуры в рацион увеличивало резистентность подопытных животных. В результате применения пробиотика побочных эффектов у щенков не выявляли.

Поскольку пробиотик применяли орально, можно полагать, что их первичный эффект будет связан с воздействием на лимфатические образования и ткани в кишечнике. Поэтому IgA был измерен в фекальном содержимом. Содержание общего IgA увеличивалось прогрессивно в обеих группах, однако в подопытной группе был выше (р<0,05) на 44-й неделе эксперимента по сравнению с контрольной. Была подтверждена иммуногенность пробиотика. Бактерии непосредственно стимулировали иммунную систему, составляющую основу кишечной слизистой.

Секреторный Ig A в кишечнике является одним из самых важных защитных факторов гуморального иммунитета слизистой оболочки. Основными функциями является защита от адгезии, колонизации и проникновения транзиторных микроорганизмов и антигенов корма через слизистый барьер. Увеличение содержания поликлонального Ig A в фекальных массах, по-видимому, играло непосредственную роль в становлении неспецифической антиэнтеропатогенной защиты организма собак, а следовательно и резистентности их организма.

Применение пробиотика до, во время и после вакцинации позволило оценить влияние пробиотика на иммунный ответ при вакцинации против чумы собак. Достоверных различий в количестве общего Ig G в плазме подопытных и контрольных животных не наблюдали. При этом, количество специфичного подкласса CDV Ig G было достоверно выше у щенков, получавших пробиотик и поддерживалось на выявленном высоком уровне до окончания исследований. Специфичный CDV- Ig G не был обнаружен перед вакцинацией (в первую неделю эксперимента), а его поступление с колостральными антителами было исключено. Это позволяет утверждать, что применение пробиотика способствовало увеличению количества специфических антител подкласса CDV Ig G.

В отличие от общего количества Ig G, общий уровень Ig A был значительно выше (р<0,01) у щенков, получающих культуру SF68. Количество специфичных антител к вирусу чумы собак было также было увеличено. Это можно расценивать как усиленный синтез Ig A плазматическими клетками, что также является следствием усиленной выработки пристеночного IgA-производства. Живая ослабленная вирус-вакцина, хотя и является слабо вирулентной, возбудитель которой способен размножаться в организме собак и запускать иммунный ответ. Это взаимодействие, вместе с чрезвычайно активизированными моноцитами, найденными в крови щенков, получавших пробиотик SF68, усиливало иммунный ответ после вакцинации животных.

Анализ FACS показал достоверное повышение количества зрелых B-лимфоцитов (CD 21⁺/MHC II). Что соответствовало увеличению Ig A в фекальных массах и в плазме крови. Это обнаруживали на 44 неделе исследований в подопытной группе собак. Напротив, количество T-лимоцитов было одинаковым в обеих исследованных группах.

Была оценена способность культуры SF68 колонизировать кишечник собак. Присутствие SF68 в кале подопытных животных было подтверждено у всех собак (n=14) в конце опыта. Эндогенный микробный пейзаж не претерпевал значительных изменений после применения пробиотика, в то же время в фекальном содержимом была выделена жизнеспособная культура SF68 в количестве 10⁷-10⁸ КОЕ/г, т.е. пробиотик способен сохраняться и размножаться в кишечнике собак.

Резюмируя результаты исследований можно утверждать, что применение пробиотика Enterococcus faecium SF68 повышало резистентность на местном и системном уровне, а также активизировало иммунный ответ собак при вакцинации, способствовало лучшей адаптации в период отъёма, при стрессовых ситуациях раннего возраста.

Summary

Pudovkin D.N.,

Saint-Petersburg State Academy of veterinary Medicine.

Biochemical and immunology aspects of application of the probiothic based on Enterococcus faecium

The gut microflora play a crucial role in several physiologic functions of the host, including maturation of the gut-associated lymphoid tissues during the first months of life. Oral administration of probiotic Enterococcus faecium shows for the first time that a dietary probiotic enhance specific immune functions in young dogs, thus offering new opportunities for the utilization of probiotics in canine nutrition.